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母液和培养基的配制
日期:2010年4月1日 来源:互联网 作者:植物组培网 点击:12823
 
  在实验中常用的培养基,可将其中的各种成分配成10倍、100倍的母液,放入冰箱中保存,用时可按比例稀释。配制母液有2点好处:一是可减少每次配制称量药品的麻烦,二是减少极微量药品在每次称量时造成的误差。母液可以配单一化合物母液,但一般都配成以下四种不同混合母液。应注意以下几个方面:A.药品称量应准确,尤其微量元素化合物应精确到0.0001克,大量元素可精确到0.01克。B.配制母液的浓度适当,一是长时间保存后易沉淀,二是浓度大,用量少,在配制培养基时易影响精确度。C.母液贮藏不宜过长,一般几个月左右,要定期检查,如出现浑浊、沉淀及霉菌等现象,就不能使用。D.母液应放在2-4℃的冰箱中保存。

    (1)大量元素混合母液:指浓度大于0.5mmol/L的元素,即含N、P、K、Ca、Mg、S等六种盐类的 混合溶液,可配成10倍母液,用时每配1000ml取100ml母液,配时要注意以下几点:a.各化合物必须充分溶解后才能混合。b.混合时注意先后顺序,特别要将钙离子与硫酸根离子,磷酸根离子错开,以免产生硫酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉淀。c.混合时要慢,边搅拌边混合。

    (2)微量元素混合母液:指小于0.5mmol/L的元素即含除Fe以外的B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等盐类的混合溶液,因含量低,一般配成100倍甚至1000倍,用时每配1000ml取10ml或1ml。配时也要注意顺次溶解后再混合,以免沉淀。

    (3)铁盐母液:铁盐必须单独配制,若同其他无机元素混合配成母液,易造成沉淀。配法是将5.57g FeSO4.7H2O水溶液缓慢加入到7.45gNa2-EDTA微沸水溶液中,并不断搅拌,最后定容到1000ml,用时每配1000ml培养基取5ml。

    (4)有机化合物母液:主要是维生素和氨基酸类物质,这些物质不能配成混合母液,一定要分别配成单独的母液,其浓度有每ml含0.1、1.0、10mg化合物,用时根据所需浓度适当取用。

    (5)植物激素:每种激素必须单独配制成母液,浓度为每ml含0.1、0.5、1.0mg激素,激素浓度的表示方法有两种,一种是ppm(或每升中mg数),另一种是mol.用时根据需要取用。由于多数激素难溶于水,它们的配法如下:

    1) IAA IBA GA3先溶与少量95%酒精,再加水定容到一定浓度。

    2) NAA可溶于热水或少量95%的酒精中,再加水定溶到一定浓度。

    3) 2,4-D不溶于水,可用1mol的NaOH溶解后,再加水定容至一定浓度。

    4) KIN和BA先溶于少量1mol的HCl中,再加水定容。

    5) 玉米素先溶于少量95%酒精中,再加水至一定浓度。

    2培养基的配置

    (1)混合培养基中的各成分。先量取大量元素母液,再依次加入微量元素母液、铁盐母液、有机成分,然后加入植物激素及其他附加成分。

    (2)溶化琼脂。称取应加的琼脂和蔗糖,将琼脂浸泡到透明后,用蒸馏水加热烧开熔化琼脂,待琼脂完全溶化后,把1加入,用pH试纸测pH值,并用0.1mol的NaOH或HCl调pH为5.6-5.8,最后加水定容至所需体积。

    (3)分装。将熬好的培养基分装于培养瓶中,分装时注意不要把培养基倒在瓶口上,以防引起污染,然后用封口膜或瓶盖封口。

    (4)灭菌。由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。⒈高温高压消毒:一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,采用三次放气灭菌法,即0.05Mpa下放三次气,在0.1Mpa维持15-20分钟。⒉过滤消毒:一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。
 
时间:2010年4月1日 点击:12823  关闭窗口
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